Pemilihan Fluorogenik dan Medium Diferensial untuk Isolasi Enterobacter sakazakii

Enterobacter sakazakii telah dicantumkan dalam bentuk yang keras pada infeksi neonatal seperti meningitis (radang otak atau sumsum tulang belakang) dan sepsis (peracunan darah). Meskipun habitat alami dari Enterobacter sakazakii tidak diketahui, formula bayi yang kering telah diidentifikasi sebagai sumber infeksi dari Enterobacter sakazakii.

VRBG (Violet Red Bile Glucose) adalah salah satu media dengan aliran yang digunakan untuk isolasi (pemisahan) dan enumerasi (menyebutkan masing-masing), tetapi media ini belum cukup selektif dan medium lain, TSA (Tryptic Soy Agar) dibutuhkan waktu inkubasi selama 48 sampai 72 jam, untuk menghasilkan karakteristik dan pigmentasi koloni yang kuning. Selanjutnya, pigmentasi kuning Enterobacter sakazakii dapat diisolasi dari specimen yang klinikal dan air yang segar.

Muytjen et.al menguraikan profil enzimatis dari Enterobacter sakazakii dan spesies dihubungkan dengan spesies menurut referensi untuk reaksi α-glukosidase. Farmer et.al. mendasarkan 53 sampai 57 strain dari Enterobacter sakazakii menjadi positif untuk aktivitas α-glukosidase. Oleh karena itu, dalam mendeteksi aktivitas α-glukosidase akan digunakan peralatan yang kuat dalam mengembangkan medium diferensial.

4-methylumbelliferyl-α-D-glukosida adalah salah satu substrat untuk substrat α-glukosidase dan menjadi fluorogenik dengan pemecahan bebas setengah dari 4-methylumbelliferyl ketika diterangkan panjang gelombang radiasi UV (ultraviolet). Sejak, salah seorang yang bukan merukan pelajar, dia telah menunjukkan pada Enterobacter sakazakiii untuk seleksi dan diferensiasi menggunakan aktivitas α-glukosidase dengan substrat fluorogenik. Pelajaran ini sebagai usaha mengembangkan medium selektif dan diferensial untuk Enterobacter sakazakiii menggunakan aktivitas α-glukosidase.

Diantara substrat α-glukosidase, 4-nitrophenyl-α-D-glukopiranosida dan 4-methylumbelliferyl-α-D-glukosida dicoba sebagai penilai. Bentuk koloni 4-nitrophenyl-α-D-glukopiranosida berwarna kuning dan 4-methylumbelliferyl-α-D-glukosida menghasilkan pijaran koloni dibawah iradiasi (365 nm). Akan tetapi, 4-nitrophenyl-α-D-glukopiranosida mempunyai pembatas karena menghasilkan warna kuning, dan 4-nitrophenol dihamburkan dengan mudah pada agar. Tetapi 4-methylumbelliferyl-α-D-glukosida memberikan hasil yang berbeda dan tidak jarang jumlah pijaran koloni Enterobacter sakazakii.

Dalam seleksi medium dasar, ada 3 macam media yang dicoba, antara lain sebagai berikut :

• Selektif dan media diferensial (VRBG agar)
• Selektif media tanpa substrat diferensial (Tryptone Bile Agar)
• Non selektif media tanpa substrat diferensial (TSA).

Semua media tersebut di atas dicantumkan 4-methylumbelliferyl-α-D-glukosida sebagai substrat.

Nama: Fefi Febriani Indah Sari

NIM: B1J006143

Email: phephy_pinky_girl@yahoo.co.id

Website: http://phephy.wordpress.com/

Pustaka :

Se-Wook Oh and Dong-Hyun Kang (2004) Fluorogenic Selective and Differential Medium for Isolation of Enterobacter sakazakii Appl. Envir. Microbiol. 2004 70: 5692-5694. [Abstract] [Full Text] [PDF]